Calcein AM/PI Double Stain Kit 活细胞/死细胞双染试剂盒
产品信息
产品货号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) |
FS1161-500T | Calcein AM/PI Double Stain Kit 活细胞/死细胞双染试剂盒 | 500T | 1050.00 |
活/死细胞双染试剂盒(荧光探针细胞染色)活/死细胞双染试剂盒(荧光探针细胞染色)
试剂盒组分
编号 组分 保存方法 产品编号/规格
FS1161-500T FS1161-1000T
FS1161-A Calcein AM Solution (4mM) -20ºC避光 50μl 50μl×2
FS1161-B PI Solution(1.5 mM) -20ºC避光 200μl 200μl×2
FS1161-C 10×Assay Buffer -20ºC~4℃ 50ml 100ml
产品描述
本钙黄绿素AM/碘化丙啶双染试剂盒(Calcein AM/PI Double Stain Kit),包含钙黄绿素AM和碘化丙啶两种荧光染料,用于对活细胞和死细胞的同时染色,即是常称的活细胞/死细胞双染试剂盒(Live/Dead Cell Double Staining Kit)。
试剂盒工作原理在于:Calcein AM(钙黄绿素乙酰甲酯),CAS 48504-34-1,一种具高度亲脂性和细胞膜渗透性的活细胞荧光染料。本身不具荧光,一旦进入细胞后,被细胞内酯酶水解生成钙黄绿素(calcein),产生亮绿色荧光(Ex/Em= 490nm/515nm)。因此,Calcein AM仅对活细胞进行染色。另一方面,碘化丙啶(PI),一种细胞核染料,不能穿透完整的活细胞膜。只能穿透死细胞的不规则区域进入细胞核,然后嵌入DNA双螺旋区域,产生红色荧光(Ex/Em= 535nm/617nm)。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发,因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。而用545 nm激发,仅可观察到死细胞。结合这些特点,Calcein, AM和PI经常被结合用作活细胞和死细胞的双重染色。
注意事项
1)由于Calcein-AM对湿度非常敏感,若是Calcein-AM溶液每次取完需要量后,必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量,分装密封保存。Calcein-AM工作液必须现配现用。
2)碘化丙啶(PI)有一定的致癌性,操作时一定要注意防护。若接触到皮肤,需要立即用自来水清洗。
3)为了您的an全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
一、试剂准备
1.1 1×反应缓冲液(Assay Buffer)的配制
从低温冰箱内取出10×Assay Buffer,根据单次用量无菌条件取出适量,用去离子水(dH2O)做10倍稀释以得到1×Assay Buffer。
1.2 1×染色工作液(Stain Buffer)的配制
1) 先将低温保存的Calcein AM溶液 (4 mM)和PI溶液(1.5 mM)室温回温至少20min,使其充分融化。【注意:*次使用时建议对储存液根据单次用量分装,特别是Calcein AM,以减少反复冻融次数。】
二、染色步骤
常见问题
1、该试剂盒适用任何细胞类型?
基本上适用于任何含酯酶活性的动物细胞。植物和xi菌细胞因含有细胞壁,Calcein-AM不能进入因此无法染色。有可能对原生质体进行染色。
2、用相同浓度有可能对所有哺乳动物细胞进行染色?
对所有细胞都用相同的浓度是很不合理的。Calcein-AM和PI的zui加工作浓度根据细胞类型差异很大。有必要根据具体细胞来确定zui价染料浓度。参考说明书染料工作浓度优化方法。
3、Calcein-AM对细胞有毒?
与其他相似的活细胞染料比较,Calcein-AM基本无毒(毒性zui小)。见文献EL.S.D.Clerck,et.al., J.Immunol.Methods, 172,115-124(1994)
4、 试剂盒如何保存?
密封-20℃保存。Calcein-AM遇潮会水解,因此直至管子温度达到室温后才能开盖。使用后拧紧盖子。用缓冲液或者培养基稀释后的染色工作液需即刻使用。不能保存后使用。